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              無外泌體胎牛血清的制備和應用

              發布時間: 2022-08-24  點擊次數: 112次
                無外泌體胎牛血清的制備和應用
                無外泌體胎牛血清適用外泌體研究,無支原體,無內毒素。胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是大多數細胞培養重要的生長支持物。天然來源的FBS會含有大量的外泌體(exosome)等囊泡(Extracellular Vesicles)成分。由于FBS來源的外泌體會對研究結果產生巨大干擾,因此,外泌體研究時必須使用去除外泌體后的FBS進行細胞培養。
                細胞在正常含血清的培養基中培養一定的時間后,細胞融合度約為 60%-70%時,移去原有含血清的培養基,換成新鮮的無外泌體胎牛血清,繼續培養 48h 左右,細胞融合度達到80%-95%左右時收取上清,該上清液即可用于提取外泌體。
                制備
                無外泌體胎牛血清的制備:用0.22um的濾膜過濾胎牛血清,濾液置于超高速離心管中,4℃,120000g超高速離心90min,收集上清液。
                應用
                無外泌體胎牛血清可用于犬MSC來源外泌體的分離:用10%無外泌體胎牛血清、1%雙抗、1%L-谷氨酰胺和88%DMEM基礎培養基配制*培養基,以制得的*培養基傳代培養MSC,取第3-5代收集上清在4℃,300g離心10min除去死細胞;收集上清后在4℃,16500g離心20min除去細胞碎片;收集上清后用0.22um的濾膜過濾;收集上清后在4℃,120000g超高速離心90min;去上清后,用生理鹽水重懸沉淀,再次以4℃,120000g超高速離心90min;去上清后,用生理鹽水重懸沉淀,收集懸液即為犬MSC外泌體制劑。

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